普林斯頓DNA測(cè)序Centri •Sep Columns
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產(chǎn)品型號(hào)：CS-900，32 Pack
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價(jià)格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-12
關(guān) 注 度：4112
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國泰宜豐科技有限公司
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹 Centri •Sep Columns
使用CENTRI-SEP離心柱可以快速、有效地將大分子（蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物復(fù)合物等）從小分子（核苷酸、緩沖液鹽分等）中純化出來。柱子基于 Sambrook 等。 描述而設(shè)計(jì)，即用凝膠過濾法將缺刻平移反應(yīng)中的DNA純化。純化裝置是由一個(gè)特殊的多孔微型離心管、干膠、清洗管和樣品收集管組成，所有的設(shè)計(jì)都是以純化為目的。
該凝膠可以極好地回收大于16堿基對(duì)或25-mer的DNA片斷，并去除高于98%的鹽分、核苷酸混合物和其它 低分子量化合物。
使用試劑級(jí)水或合適的緩沖液水化離心柱，在微量離心管或吊桶式離心管中離心，去除液體。然后，將樣品加到凝膠柱上，再次離心，進(jìn)行樣品處理。通過去除低分子量的化合物而使樣品純化，再使用選擇的緩沖液將純化的蛋白交換出來。
1、當(dāng)用ABI 373A 和 377A進(jìn)行DNA測(cè)序時(shí)的熒光素反應(yīng)混合物的純化。
2、去除下列反應(yīng)DNA/RNA中游離的標(biāo)記dNTP’s：
z 缺刻平移
z 末端標(biāo)記反應(yīng)
z 聚合反應(yīng)
3、在多種限制性消化反應(yīng)中，脫鹽、去除痕量酚或交換緩沖液中的鹽分。
4、蛋白的純化與脫鹽。
對(duì)于一些通用技術(shù)如酚/氯仿抽提和乙醇沉淀等，這些離心柱的使用具有方便、快速、無毒等優(yōu)良特性。
z 迅速有效的分離
z 不需預(yù)選擇緩沖液
z 室溫條件下，離心柱穩(wěn)定
z 方便 20-100μl樣品的純化
離心注意事項(xiàng)：
z 使用水平式轉(zhuǎn)子或吊桶式轉(zhuǎn)子可以得到最高的產(chǎn)量。然而，固定角轉(zhuǎn)子微量離心也可以得到滿意的結(jié)果，并且省時(shí)。
z 對(duì)于可變速微量離心，不要使用按壓式按鈕，因?yàn)檗D(zhuǎn)速會(huì)超過設(shè)定而使轉(zhuǎn)子以最大的離心力運(yùn)行。
在這里：
rpm = 每分鐘轉(zhuǎn)
RCF= 相對(duì)離心力
r = 半徑，是從轉(zhuǎn)桿中心到轉(zhuǎn)子桶底部的距離
質(zhì)量控制：對(duì)每一批CENTRI-SEP離心柱的分離效率都經(jīng)過檢測(cè)，保證精確性。
材料供給：
z CENTRI-SEP離心柱包括干膠
z 清洗管（2ml）
z 樣品收集管（1.5ml）
推薦附加材料：
z 微量離心機(jī)（Eppendorf 5415C，可
變速或等速）
z 可調(diào)移液器（Pipetman 100 μl）
z 移液Tips(槍頭)
z 球狀移液管（Dispo, 2ml乳膠）
z 微量離心管架
z 振蕩器
常見問題：
1. 離心柱水化之后沒有將間隙液體除凈。
2. 在純化樣品過程中觸摸了離心柱。這兩種操作錯(cuò)誤都會(huì)導(dǎo)致無效的分離。
解決方法：
1. 如果注意到某一離心柱在第一次離心后所釋放出來的液體比其他的少，則再短暫離心一次，通常可除凈多余的液體。
2. 將樣品直接點(diǎn)在凝膠床的中心，不要讓樣品接觸離心柱的壁。
（1）Reference: Sambrook, J., Fritsch. E.F., and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold
Spring Harbor Laboratory. 1989.
訂貨信息：
目錄號(hào) 規(guī)格
CS-900 32Pack
CS-901 100Pack
測(cè)序前的染料終止子的去除
由 Applied Biosystems 有限公司推薦的 CENTRI-SEP 離心柱可以將已完成的 DNA 測(cè)序反應(yīng)中過量的DyeDeoxy™ 終止子高效、可靠地去除。下列方法可與 Taq DyeDeoxy™ 和 ABI Prism™終止循環(huán)測(cè)序試劑盒聯(lián)合使用，還可與 AmpliTaq®, FS等聯(lián)合使用，用 ABI 373A or 377A 測(cè)序儀讀取。
1. 水化離心柱
1.1 輕輕敲打柱子以保證干膠沉淀到離心柱底部。
1.2 打開離心柱頂端的蓋子，加入0.80 ml試劑級(jí)水或緩沖液使干膠吸脹。調(diào)整離心柱底部的塞子使其處于合適的位置以便離心柱可以自己站立。再蓋上蓋子，搖動(dòng)、倒轉(zhuǎn)、或短時(shí)震蕩使干膠水化。干膠完全水化是非常重要的。
1.3 在使用之前，離心柱需要在室溫條件下水化至少30 分鐘。水化后的離心柱于 4°C可以冷藏幾天。補(bǔ)充10 mM 疊氮化鈉可以儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間。在繼續(xù)使用之前，需將離心柱恢復(fù)到室溫。
2. 去除縫隙液體
2.1 倒轉(zhuǎn)或短促敲打離心柱，使凝膠乳漿化，并盡量
使其保持水平狀，清除離心柱凝膠中的氣泡，然后將離心柱放在微量試管架上使膠沉淀。
2.2 當(dāng)凝膠已經(jīng)沉淀無氣泡后，打開離心柱的頂蓋，去掉底部的塞子。
2.3 將離心柱中過量的液體在清洗管（2ml）中控干。如果液體沒有通過離心柱的末端立刻流出來，則使用一只2ml的乳膠頭吸管，在柱子的頂端給予一定的空氣壓力，迫使液體開始流過離心柱過濾器。在液體流完之后，離心柱將自動(dòng)停止。大約200-250μl的液體從離心柱中流出，棄掉液體。
2.4 在可變速離心機(jī)上以750g 將離心柱和清洗管一起離心2分鐘，以便去除縫隙中的液體。例如：使用Eppendorf 5415C型微量離心管，在750g（7.3cm轉(zhuǎn)子）的離心速度為3,000rpm。如果使用固定角微量離心機(jī)， 一定要在離心柱中使用定位標(biāo)記模，以便追蹤離心柱的位置。
2.5 除去大約300μl液體，如果離心柱末端還有一小滴液體，用紙吸掉。棄去清洗管和間隙液體。不要使凝膠過分干燥。即刻進(jìn)行樣品處理。
3. 樣品處理
3.1 將離心柱置于明亮處，在凝膠頂端加入20μl 已完成DyeDeoxy™終止子反應(yīng)的混合物，仔細(xì)地將樣品直接地加入到凝膠床頂端的中心位置，不要攪動(dòng)凝膠的表面（見圖1）。不要用反應(yīng)混合物或樣品吸管的頭觸及離心柱的側(cè)壁，因?yàn)檫@會(huì)降低純化的效率，以及由于過量的染料使實(shí)驗(yàn)失敗。
3.2 將離心柱放入樣品收集管（1.5ml）后，置于轉(zhuǎn)子中，保持固有的離心柱方向。柱子中凝膠介質(zhì)的最高點(diǎn)應(yīng)該總是朝向轉(zhuǎn)子的外側(cè)（見圖1）。在750 ⋅ g離心柱子和收集管 2 分鐘。純化的樣品將被收集在樣品收集管的底部。棄去離心柱，使用ABI樣品制備方法繼續(xù)處理樣品。
3.3 真空離心干燥樣品，不要使用加熱法。
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